Lysbildefestingsinstruksjonene
Før du begynner på lysbildeforberedelsesprosessen, må du forsikre deg om at du har samlet alle nødvendige materialer, inkludert lysbilder, dekkglipp, droppere eller pipetter, og eventuelle kjemikalier eller flekker du har tenkt å bruke.
Det er to primære typer lysbilder du jobber med:
1. Standard flatglassglide.
2. Depresjonen eller brønnglasset, som har en liten brønn eller innrykk i sentrum designet for å holde en dråpe vann eller flytende stoff. Disse er vanligvis dyrere og brukes ofte uten dekkglid.
Standard lysbilder kan være laget av enten plast eller glass, og måler 1 x 3 tommer (25 x 75 mm) i størrelse og 1 til 1,2 mm i tykkelse.
For våte lysbilder er en dekkglid eller dekkglass viktig. Dette er et ultra-tynt, firkantet glassstykke (eller plast) som er nøye plassert over prøvedråpen. Uten dekselet ville overflatespenningen føre til at dråpen danner en kuppelform. Dekselet teller denne spenningen, og sikrer at prøven ligger flatt for presis undersøkelse med minimal fokusering. Dessuten fungerer dekselet som en beskyttelse, og forhindrer at objektivlinsen forstyrrer prøvedråpen.
Mikroskopglidefester
Mikroskopfester refererer til metodene som brukes for å sikre mikroskopglass eller prøver for observasjon. Det er først og fremst fire typer:
1. Lysbildefester:Dette er den vanligste typen og involverer å plassere et eksemplar på et flatt glassglide, ofte ved bruk av et monteringsmedium (som en væske eller gel) for å holde det på plass. En dekkglid blir deretter lagt til for å beskytte prøven og gi en flat overflate for visning.
2. hulrom eller brønnfester:Disse lysbildene har en liten brønn eller depresjon i sentrum, designet for å holde en dråpe væske, for eksempel vann eller en spesialisert monteringsvæske. De brukes når de jobber med prøver som krever nedsenking i væske.
3. Midlertidige monteringer:Disse festene er ikke ment for langsiktig lagring eller observasjon. De involverer enkle og raske metoder som å plassere et eksemplar på et lysbilde med en dråpe vann. De brukes ofte til å observere levende organismer eller tidsfølsomme prøver.
4. Permanente fester:Disse er designet for langvarig lagring og observasjon. De involverer mer komplekse prosedyrer, inkludert bruk av spesialiserte monteringsmedier som herder over tid, og innkapsling av prøven i et gjennomsiktig medium. Denne typen montering brukes ofte til pedagogiske lysbilder og vitenskapelig forskning.
Hver type montering har sine spesifikke applikasjoner og velges basert på arten av prøven og formålet med observasjonen.
Fire vanlige måter å montere et mikroskopglide
Det er flere vanlige metoder for å montere et mikroskopglide, avhengig av type prøve og formålet med observasjon. Her er fire vanlige måter å montere et mikroskopglide:
Tørr montering:
Prosedyre: I denne metoden plasseres et eksemplar direkte på et rent, tørt mikroskopglide. Det brukes ofte til prøver som ikke krever ekstra fuktighet eller nedsenking i en væske.
Bruksområder: Tørr montering er egnet for å observere faste prøver som plantedeler, hår eller mineraler.
Våt montering:
Prosedyre: En liten dråpe væske (vanligvis vann eller en spesialisert monteringsvæske) plasseres på lysbildet, og prøven blir deretter lagt til denne dråpen. En dekkglass plasseres forsiktig over prøven for å forhindre tørking og forvrengning.
Bruksområder: Våtfester brukes til å observere levende organismer, celler eller prøver som krever nedsenking i en væske.
Squash montering:
PROSEDYRE: Denne teknikken innebærer å plassere et eksemplar på et lysbilde og deretter trykke den forsiktig ned med en dekkglid eller et annet lysbilde for å flate den ut. Dette brukes ofte til mykt vev eller delikate plantedeler for å skape et tynt, gjennomsiktig lag for observasjon.
Bruksområder: Squashfester brukes til å undersøke vev, spesielt i plantebiologi.
Smørmontering:
PROSEDYRE: En liten mengde av prøven (vanligvis et væske- eller semi-væske-stoff) spres tynt og jevnt over et lysbilde, ofte ved å bruke kanten av et annet lysbilde. Det er da lov til å lufttørke eller kan fikses med et kjemisk middel.
Bruksområder: Smørfester brukes ofte til å observere mikroorganismer som bakterier eller for å fremstille blodutstemming for mikroskopi.
Disse metodene imøtekommer forskjellige typer prøver og deres spesifikke krav til observasjon. Valget av monteringsteknikk avhenger av faktorer som arten av prøven, formålet med observasjon og ønsket detaljnivå og klarhet.
Mikroskopflekker
Mikroskopflekker, også kjent som biologiske flekker eller fargestoffer, er stoffer som brukes i mikroskopi for å forbedre kontrasten og synligheten til biologiske prøver. De fungerer ved selektiv binding til spesifikke cellulære komponenter, for eksempel proteiner, nukleinsyrer eller lipider, noe som gir enklere visualisering og differensiering av cellulære strukturer. Her er noen vanlige typer mikroskopflekker:
1. Hematoksylin og eosin (H&E):
Type: Kombinasjonsflekk.
Bruk: En av de mest brukte flekkene i histologi, hematoksylinfarger cellekjerner blå-lilla, mens eosin flekker cytoplasma og noen ekstracellulære strukturer rosa.
2. Metylenblått:
Type: Grunnleggende fargestoff.
Bruk: flekker cellekjerner blå. Det brukes ofte til generelle cytologi og mikrobiologiske studier.
3. Giemsa:
Type: Kombinasjonsflekk.
Bruk: Brukes til farging av blodceller, det skiller kjernefysiske og cytoplasmatiske komponenter i en rekke farger, noe som gir mulighet for identifisering av forskjellige celletyper.
4. Gram flekk:
Type: Kombinasjonsflekk.
Bruk: Skiller mellom to hovedkategorier av bakterier: Gram-positive (som beholder den krystallfiolette flekken) og Gram-negativ (som tar opp Safranin Countstain).
5. Wrights flekk:
Type: Kombinasjonsflekk.
Bruk: Denne flekken primært brukes til blodutstemming, og muliggjør differensiering av blodcelletyper og identifisering av avvik.
6. Lugols jod:
Type: Jodbasert flekk.
Bruk: Brukes i forbindelse med Grams jod, kan den brukes til å forbedre kontrasten til visse cellulære strukturer.
7. Olje rød o:
Type: Lipofilt fargestoff.
Bruk: Binder spesifikt til lipider, noe som gjør det nyttig for fargestrukturer som fettdråper i celler.
8. Periodisk syre-Schiff (PAS):
Type: Kjemisk reaksjonsbasert flekk.
Bruk: Reagerer med karbohydrater, og fremhever strukturer som glykogen, muciner og andre glykoproteiner.
9. Toluidin blå:
Type: Grunnleggende fargestoff.
Bruk: Flekker Syre komponenter i celler og vev, inkludert mastcellegranuler og nukleinsyrer.
10. Safranin:
Type: Grunnleggende fargestoff.
Bruk: Brukes som en teller i Gram-farging for å fargelegge gramnegative bakterier.
Dette er bare noen få eksempler, og det er mange andre spesialiserte flekker som brukes til spesifikke formål innen mikroskopi, for eksempel spesielle flekker for bindevev, nervefibre eller spesifikke cellestrukturer. Valget av flekk avhenger av typen eksemplar og informasjonen som trengs fra den mikroskopiske undersøkelsen.
Mikroskopfargingstrinn
1. Begynn med å tilberede en våt monteringsglide, plassere prøven på et rent mikroskopglide.
2. Samle en dråpe av den valgte flekken ved hjelp av en øyedråper eller pipette.
3. Plasser denne dråpen flekken på ytterkanten av dekkglasset, og sørg for at den kontakter lysbildekanten.
4. For å lette den jevn fordelingen av flekken, plasser et stykke serviett eller papirhåndkle langs motsatt side av dekselet, og trykker det fast mot kanten.
5. Bruk om nødvendig et ekstra flekkfall for å garantere fullstendig dekning av prøven.
6. Lysbildet ditt er nå fullt utarbeidet for observasjon under mikroskopet.
